平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Parallel reaction monitoring,PRM)能夠基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)或肽段的定量。PRM可以同時(shí)監(jiān)控所有碎片離子,不需要識(shí)別和驗(yàn)證特定離子,因而具有更快、更簡(jiǎn)單的工作流程,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)或肽段的相對(duì)或絕對(duì)定量分析。
較高通量
通量遠(yuǎn)超Western blot,一次可檢測(cè)50個(gè)蛋白
廣泛適用
不借助抗體,不受物種限制
準(zhǔn)確性高
特異性檢測(cè)目標(biāo)肽段,具有超高的定量準(zhǔn)確性。
注意事項(xiàng)
需要DDA建庫(kù)
驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)、翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果
針對(duì)特定的一個(gè)或幾個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行絕對(duì)定量或相對(duì)定量分析
樣本類型 | 送樣量 | |
動(dòng)物組織 | 常規(guī)組織(腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉等柔軟組織) | 10 mg |
堅(jiān)硬組織(軟骨、毛發(fā)) | 100 mg | |
植物組織 | 柔軟組織(木本植物的葉、花等,草本植物,藻類,蕨類植物) | 200 mg |
堅(jiān)硬組織(根、樹(shù)皮、樹(shù)枝,果實(shí)種子等) | 2 g | |
微生物 | 常見(jiàn)細(xì)菌、真菌菌體(菌體沉淀)、精細(xì)胞 | 30 μL |
細(xì)胞 | 懸浮/貼壁培養(yǎng)細(xì)胞(細(xì)胞計(jì)數(shù)/沉淀) | 2×106或20 μL |
液體類 | 血漿/血清(不去除高豐度) | 5 μL |
血漿/血清(去除高豐度-伯樂(lè)) | 100 μL | |
血漿/血清(去除高豐度-TOP2/TOP14) | 50 μL | |
血漿/血清(去除高豐度-DMB蛋白冠) | 50 μL | |
腦脊液(不去除高豐度) | 100 μL | |
腦脊液(去除高豐度-TOP2/TOP14) | 300 μL | |
卵泡液(不去高豐度) | 100 μL | |
卵泡液(去除高豐度-伯樂(lè))、尿液,精液 | 1 mL | |
淋巴液、關(guān)節(jié)液、穿刺液、腹水 | 3 mL | |
唾液/淚液/乳汁 | 500 μL | |
培養(yǎng)基上清(不能使用含血清的培養(yǎng)基) | 5 mL | |
FFPE | 每片厚度10 μm,面積1.5×2 cm | 2-5片 |
其他 | 蛋白溶液(最佳Buffer是8M Urea) | 10 μg |
PRM技術(shù)是在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)技術(shù)的基礎(chǔ)上演化而來(lái)的。它基于高分辨、高精度質(zhì)譜,首先在一級(jí)質(zhì)譜中選擇性地檢測(cè)目標(biāo)肽段的母離子信息,隨后對(duì)母離子進(jìn)行碎裂,在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片的信息,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的靶向檢測(cè)。
PRM可對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段的靶向驗(yàn)證和相對(duì)或絕對(duì)定量,常用于廣篩之后的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。
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